细胞进行传代常规操作

在我们培养细胞的过程中，对细胞进行传代是一项常规的操作，传代可以帮助我们扩大细胞培养的数量，同时也避免了因细胞进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。今天我们简单讲讲传代操作（主要针对贴壁细胞）：

操作步骤：

1.紫外照射灭jun后，我们应该穿好灭jun服，戴好灭jun 手套和口罩。

2.从培养箱取出细胞培养瓶（一般选择处于对数期的细胞），用酒精喷壶在培养瓶表面喷洒75%酒精消du，转移培养瓶到超净台。

3.打开盖子，轻轻吸出旧的培养液，用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次（注意从侧壁加入，以免冲掉细胞），弃去PBS缓冲液。

4.可用移液器加入1-2ml胰酶（具体量根据实验需要确定，此处仅为参考用量），“十字”晃动，使胰酶充分接触细胞。

5.将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台，镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆且大量脱落时，准备终止消化，用75%的酒精喷洒培养瓶表面，转移到超净台

6.用移液器（或巴氏吸管）加入等量含血清培养基，终止消化。移液器（或巴氏吸管）充分吹打（动作也不要太猛，毕竟细胞也是蛮脆弱的），使细胞能够完全脱落。

7.将培养瓶中混合液体转移至离心管中（离心管规格根据实验需要确定），配平，离心5分钟左右（离心机转速根据细胞种类而定，常见的有1000rpm/min）

8.离心好后，用酒精喷壶喷洒离心管表面，转移进超净台，打开盖子，将上清液倒入废液缸。

9.加入适量体积含血清培养基，用移液器或巴氏吸管轻轻吹打，制成细胞悬液。

10.将细胞悬液分装进2个（或多个）洁净灭jun培养瓶，加入适量培养基，盖好盖子

11.将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台，观察细胞情况，细胞应保证一定数量，数量太少会影响生长情况。

12.在培养瓶上做标记，注明传代时间，细胞种类，操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面，然后应记得整理操作台，用75%酒精擦拭超净台台面，清理废液和垃圾。

     注意，全程严格无菌操作！