
产品名称
兔心房心肌细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
心脏组织
生长特性
贴壁培养
细胞形态
柱状细胞
分类
兔原代细胞
货号
A01X2019
用途
仅供科研实验
细胞特性:
1)组织来源于实验动物的正常心脏组织。本细胞为终末分化细胞,增殖能力很弱,建议客户收到细胞后直接用于后续实验,不要进行扩增培养。
2)细胞鉴定:肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式:柱状细胞,不规则细胞,贴壁培养。
推荐培养基
我们推荐使用 DELF 原代心肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。
细胞简介:
心脏壁主要由心肌构成,心房壁比心室壁薄。心肌的工作细胞包括心房肌和心室肌。心肌细胞为短柱状,一般只有一个细胞核,心肌细胞之间有闰盘结构。心房与心室的心肌层不直接相连,它们分别起止于心房和心室交界处的纤维支架,形成各自独立的肌性壁,从而保证心房和心室各自进行独立的收缩舒张,以推动血液在心脏内的定向流动。临床研究表明,在房颤患者心房肌细胞内,发现存在有异常增高的细胞内钙蓄积,并证实心肌细胞内钙超载在心律失常的发生中起着关键作用。此外,在房颤患者心房细胞内也发现有 CaMK Ⅱ的异常高表达。
①动物处理:用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡,然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒(浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内,影响培养)后迅速置于的培养皿中,带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材:将乳鼠俯卧位,用乙醇进行一次背部,再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤,剖开腹部,取出肝脏放入另一培养皿中,除去其他连带组织,用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次,每次1~2 ml,洗去血污,将废液弃于废液杯中。
③组织分离:用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除,然后将肝组织反复剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小块后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次,弃废液。
④接种:用吸管加2滴小牛血清,小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液,然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地(组织块之间相距约0.5 cm左右)排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。

⑤培养:将培养瓶慢慢翻转,使瓶底向上,加入1~2 ml培养液,拧紧瓶盖,做好标记,置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时,待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后,再缓慢翻转培养瓶(尽量注意不要使组织块漂浮起来),另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块,将瓶盖调整在略微松弛状态,继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察:细胞接种后一般几个小时内即可贴壁,并开始生长。如果无污染且细胞生长良好,可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色,此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞,这时可进行传代培养。
原代细胞步骤:
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织,剔除包膜及坏死组织,无菌PBS清洗3-5次;切成约1mm3组织块;
2. 加入2mmol 的 EDTA,摇匀后放置冰上约 30-60min;
3. 离心,并加入胶原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期间,置于37°培养箱。每15min摇晃一次,消化时间根据肿瘤组织来定,约1-2h;
5. 待大部分组织块消化成透明状时,用 40μm 的细胞滤网过滤细胞,收集;
6. 用培养基重悬,置于培养箱培养。

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