产品名称
人肝癌相关成纤维细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
肝癌组织
生长特性
贴壁培养
细胞形态
梭形细胞
分类
人原代细胞
货号
A01X1314
用途
仅供科研实验
细胞特性：
1）细胞来源于人肝癌组织。
2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式：梭形细胞，贴壁培养。
推荐培养基
我们推荐使用 delf 原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。
细胞简介：
肝癌是一种恶性程度，预后极差的恶性肿瘤，虽然现代新的肿瘤化疗、生物和手段非常多，但由于其早期诊断率低、术后复发率高而预后差。化疗是目前肝癌的主要辅助手段之一。
肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境中主要的细胞成分之一，在恶性肿瘤的发生、发展中起着重要作用。
①动物处理：用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡，然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒（浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内，影响培养）后迅速置于的培养皿中，带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材：将乳鼠俯卧位，用乙醇进行一次背部，再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤，剖开腹部，取出肝脏放入另一培养皿中，除去其他连带组织，用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次，每次1~2 ml，洗去血污，将废液弃于废液杯中。
③组织分离：用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除，然后将肝组织反复剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小块后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次，弃废液。
④接种：用吸管加2滴小牛血清，小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地（组织块之间相距约0.5 cm左右）排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。
⑤培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入1~2 ml培养液，拧紧瓶盖，做好标记，置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢翻转培养瓶（尽量注意不要使组织块漂浮起来），另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块，将瓶盖调整在略微松弛状态，继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察：细胞接种后一般几个小时内即可贴壁，并开始生长。如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞，这时可进行传代培养。
原代细胞步骤：
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；
2. 加入2mmol 的 EDTA，摇匀后放置冰上约 30-60min；
3. 离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期间，置于37°培养箱。每15min摇晃一次，消化时间根据肿瘤组织来定，约1-2h；
5. 待大部分组织块消化成透明状时，用 40μm 的细胞滤网过滤细胞，收集；
6. 用培养基重悬，置于培养箱培养。
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