产品名称
人肝动脉平滑肌细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
肝动脉组织
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
分类
人原代细胞
货号
A01X1279
用途
仅供科研实验
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞简介：
人肝动脉平滑肌细胞分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血，分别来源于胃左动脉、腹腔动脉和肠系膜上动脉，这3条动脉分别供应肝脏的不同部位。出生后，一般保留一条动脉，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左、右肝动脉供应左、右半肝。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉。但也有2条动脉并存的情况，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉（25%），起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉（10%），而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见。此外，还有5%像胚胎期一样，3条动脉同时存在。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时，此种异位起源的肝动脉称替代动脉，如果在常见肝动脉类型外，还有一支这种异位起始的动脉供应肝脏的一部分血流，这种肝动脉称副肝动脉。肝动脉平滑肌细胞是肝动脉的重要结构细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。肝动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管进展的关键因素，新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管的发展及稳定性有关。
方法简介：
公司实验室分离的人肝动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：
公司实验室分离的人肝动脉平滑肌细胞经α-SMA荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
①动物处理：用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡，然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒（浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内，影响培养）后迅速置于的培养皿中，带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材：将乳鼠俯卧位，用乙醇进行一次背部，再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤，剖开腹部，取出肝脏放入另一培养皿中，除去其他连带组织，用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次，每次1~2 ml，洗去血污，将废液弃于废液杯中。
③组织分离：用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除，然后将肝组织反复剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小块后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次，弃废液。
④接种：用吸管加2滴小牛血清，小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地（组织块之间相距约0.5 cm左右）排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。
⑤培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入1~2 ml培养液，拧紧瓶盖，做好标记，置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢翻转培养瓶（尽量注意不要使组织块漂浮起来），另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块，将瓶盖调整在略微松弛状态，继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察：细胞接种后一般几个小时内即可贴壁，并开始生长。如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞，这时可进行传代培养。
原代细胞步骤：
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；
2. 加入2mmol 的 EDTA，摇匀后放置冰上约 30-60min；
3. 离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期间，置于37°培养箱。每15min摇晃一次，消化时间根据肿瘤组织来定，约1-2h；
5. 待大部分组织块消化成透明状时，用 40μm 的细胞滤网过滤细胞，收集；
6. 用培养基重悬，置于培养箱培养。
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