细胞简介：
人Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米，基底部是基底膜，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞，分泌表面活性物质(二棕榈酰卵磷脂)，以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅、呈泡沫状。电镜下，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体。小体内的主要成分为磷脂，以二棕榈酰卵磷脂为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质(surfactant)。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。
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组织来源 |
产品规格 |
货号 | 用途 |
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肺组织 |
5×105cells/T25细胞培养瓶 |
A01X1254 |
仅供科研研究实验 |
培养信息：
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
方法简介：
质量检测：
实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、酵母等。
实验具体步骤：
（1）动物福利：小鼠麻醉牺牲/处死，或者断颈处死；
（2）小鼠：可以将小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者简单粗暴的使用75%乙醇在烧杯中浸泡3min，然后转移至无菌操作台使用无菌吸水纸/棉花将酒精擦拭干净；
（3）取出心脏组织：用眼科剪在镊子的配合下打开腹腔，取出心脏组织，置于含有2X双抗冰冷PBS的培养皿中；
（4）组织：在含有2X双抗PBS中将心脏一分为二，充分洗涤里边的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎组织：使用眼科钳或者剪刀，将心脏组织剪碎至1-3 mm3大小组织块；（备注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml胶原酶Ⅰ于37℃联合消化组织3-5 min，
利于后期细胞从组织块中爬出来，同时能够消除部分结缔组织等）
（6）种植组织块：将上述组织使用2X双抗冰冷PBS洗涤3次，每次5min，然后使用完全培养基（含有1X双抗）洗涤一次。经过的心脏破碎组织块经过离心后，可以用细头
镊子将组织块种植于培养皿中（备注：破碎组织块可能还含有液体，可以在一个无菌培养皿底沾几下，把液体）；种植完成后，可以将培养皿正置3-5小时，然后更换培养皿的
盖子正置放置过夜（也可以使用封口膜密闭培养皿在4℃正置过夜）；
（7）培养基培养：将组织块中轻柔缓慢的加入完全培养基，然后在恒温潮湿细胞培养箱（37℃，5% CO2）培养48h后观察单个细胞从组织块中爬出情况，一般3-5 day能够达到传代的爬出效率；
（8）贴壁细胞传代：当单个细胞从组织块爬出面积在组织块3-5倍，进行传代，此时可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化组织块爬出的细胞，消化时间根据正常细胞消化时间即可，当然可以在消化过程中不断管擦爬出细胞的皱缩情况，一旦达到消化完成（皱缩细胞≥70%）即可使用完全培养基终止消化。在吹打单个细胞时候，一定要轻柔/缓慢，不能吹打到组织块，如果组织块掉下来，大概率是不会再贴壁成功啦。根据细胞数量种植到对应的培养皿/瓶中；
（9）鉴定：细胞在传代至代、第五代、第十代时候可以将部分细胞进行鉴定，鉴定办法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式细胞术等。公司正在出售的产品：
| 羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒 | B细胞迁移基因4抗体 |
| 羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 F2抗体 |
| 羟赖氨酸糖苷(HOLG)ELISA试剂盒 | 有丝分裂蛋白BUB3重组兔单克隆抗体 |
| 羟赖氨酸(Hyl)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 4V2抗体 |
| 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)ELISA试剂盒 | BXDC1蛋白抗体 |
| 羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 4X1抗体 |
| 羟基赖正己氨酸(HLNL)ELISA试剂盒 | 10号染色体开放阅读框140抗体 |
| 羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 IVF8抗体 |
| 强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒 | 10号染色体开放阅读框30抗体 |
| 潜伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA试剂盒 | 细胞因子样蛋白1抗体 |
| 前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒 | CULLIN抗体 |
| 前铁调素(Pro-Hepc)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 26B抗体 |
| 前列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒 | 10号染色体开放阅读框63抗体 |
| 前列腺素H2(PGH2)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 2C11抗体 |
| 前列腺素F2α(PGF2α)ELISA试剂盒 | 11号染色体开放阅读框65抗体 |
| 前列腺素F(PGF)ELISA试剂盒 | 细胞色素P450 2D10抗体 |
| 前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒 | 11号染色体开放阅读框67抗体 |
| 前列腺素E1(PGE1)ELISA试剂盒 | 人II型肺泡上皮细胞细胞色素P450 3A5抗体 |
| 前列腺素D2(PGD2)ELISA试剂盒 | 11号染色体开放阅读框71抗体 |
| 前列腺素A1(PGA1)ELISA试剂盒 | 细胞角蛋白15重组兔单克隆抗体 |
一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，可采用低速离心。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。
二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。其中，机械分散法的特点是简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差，适用于处理纤维成分少的软组织。消化分离法是指把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。