商品属性：
产品名称
英文名称
kyse30:kyse30
产品货号
A01X816
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%,
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
上皮细胞样，带有长的伪足
产品种属
人
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
组织来源
食管鳞状上皮
用途
仅供科研研究实验
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样，带有长的伪足
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养方案A（默认）
生长培养基:
RPMI-1640＋Ham's F-12＋2mM L-Glutamine＋10% FBS＋1% P/S
培养条件:
气相：空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:5
推荐换液频率 2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述 Derived from well
differentiated invasive esophageal squamous cell carcinoma resected from middle
intra-thoracic esophagus of a 64-year-old Japanese man prior to treatment; cell
line Established from tumor cells heterotransplanted into athymic mice;
described in the literature to be heterotransplantable in athymic mice and to
carry p53 mutation and amplification of cERB B, MYC and CYCLIN D1
年龄（性别） 女性；64岁
组织来源 食管鳞状上皮
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 食管癌细胞
生物等级 BSL-1
倍增时间 ~20-30 hours
保藏机构 DSMZ; ACC-351 ECACC; 94072011 JCRB; JCRB0188
细胞培养操作：
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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