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产品名称 |
规格 |
货号 |
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吉西他滨 |
10mg |
FS-X020020 |
产品名称：吉西他滨
英文名称：GEM
货号：BH-X020020
规格：10mg
细胞培养操作规程：
主要功能：
（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。
（3）与血管的进展和稳定有关。
生理变化：
（1）主动脉硬化。
（2）主动脉瘤
（3）主动脉钙化。
基本特性：
（1）组织来源于正常大鼠大动脉组织。
（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色验证。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、酵母。
培养步骤：
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
PBS，（10X） pH 7.270013-032
细琼脂（1 号琼脂）Agar Bacteriological(Agar No.1) Oxoid500g
Liver Broth 肝肉汤 Oxoid500G
平板计数琼脂 (CM0325) Oxoid
Rogosa 琼脂 (CM0627) Oxoid
TCH（噻吩-2-羧酸酰肼） 0.1加入改良罗氏培养基中制成TCH培养基，用于分枝杆鉴定
YNB 培养基 100用于基因工程中酵母的发酵培养
吉西他滨鱼精蛋白3(PRM3)elisa检测试剂盒英文名称：PRM3 ELISA Kit，英文缩写：PRM3，产品别名：鱼精蛋白3(PRM3)ELISA检测试剂盒，鱼精蛋白3(PRM3)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
野鼠色基因相关蛋白(AGRP)elisa检测试剂盒英文名称：AGRP ELISA Kit，英文缩写：AGRP，产品别名：野鼠色基因相关蛋白(AGRP)ELISA检测试剂盒，野鼠色基因相关蛋白(AGRP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
乙二醛酶Ⅰ(GLO1)elisa检测试剂盒英文名称：GLO1 ELISA Kit，英文缩写：GLO1，产品别名：乙二醛酶Ⅰ(GLO1)ELISA检测试剂盒，乙二醛酶Ⅰ(GLO1)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
亚精胺合酶(SRM)elisa检测试剂盒英文名称：SRM ELISA Kit，英文缩写：SRM，产品别名：亚精胺合酶(SRM)ELISA检测试剂盒，亚精胺合酶(SRM)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
血清淀粉样蛋白A2(SAA2)elisa检测试剂盒英文名称：SAA2 ELISA Kit，英文缩写：SAA2，产品别名：血清淀粉样蛋白A2(SAA2)ELISA检测试剂盒，血清淀粉样蛋白A2(SAA2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
血管活性肠肽受体1(VIPR1)elisa检测试剂盒英文名称：VIPR1 ELISA Kit，英文缩写：VIPR1，产品别名：血管活性肠肽受体1(VIPR1)ELISA检测试剂盒，血管活性肠肽受体1(VIPR1)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
信号素7A(SEMA7A)elisa检测试剂盒英文名称：SEMA7A ELISA Kit，英文缩写：SEMA7A，产品别名：信号素7A(SEMA7A)ELISA检测试剂盒，信号素7A(SEMA7A)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
小蛋白β(PARVβ)elisa检测试剂盒英文名称：PARVβ ELISA Kit，英文缩写：PARVβ，产品别名：小蛋白β(PARVβ)ELISA检测试剂盒，小蛋白β(PARVβ)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
线粒体融合素2(MFN2)elisa检测试剂盒英文名称：MFN2 ELISA Kit，英文缩写：MFN2，产品别名：线粒体融合素2(MFN2)ELISA检测试剂盒，线粒体融合素2(MFN2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
周期素K(CCNK)elisa检测试剂盒英文名称：CCNK ELISA Kit，英文缩写：CCNK，产品别名：周期素K(CCNK)ELISA检测试剂盒，周期素K(CCNK)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
球蛋白(CYGB)elisa检测试剂盒英文名称：CYGB ELISA Kit，英文缩写：CYGB，产品别名：球蛋白(CYGB)ELISA检测试剂盒，球蛋白(CYGB)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。