产品名称：原代NK细胞培养体系
产品规格：100ml/500ml
货号：BH-X019977
保存温度（℃）：2-8℃/-20℃
运输温度（℃）：2-8℃/-20℃
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。
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产品名称 |
原代NK细胞培养体系 |
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规格 |
100ml/500ml |
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货号 |
FS-X019977 |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
细胞处理方法：
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。
一．贴壁细胞
客户接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。
二．悬浮细胞
1. 接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2 培养。
液体D（0.1%蛋白胨水和吐温80） 无实验中用作冲洗/稀释液300mL*10
胰酶-EDTA，
0.25%胰酶，EDTA。4Na 不含钙镁离子，含酚红
保存：-5 - -20°
L-Trptophan L-色氨酸 Japan25g
蛋白胨水 (Andrade) Oxoid
3号培养基(Assay 肉汤) (CM0287) Oxoid
卡那霉素七叶甙叠氮琼脂基础(CM0591) Oxoid
赫氏培养基 250(g)
原代NK细胞培养体系Discs大同源物4(DLG4)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforDiscs,LargeHomolog4(DLG4) 规格：48T/96T 进口、国产
血型糖蛋白B(GYPB)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforGlycophorinB(GYPB) 规格：48T/96T 进口、国产
S100钙结合蛋白A10(S100A10)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforS100CalciumBindingProteinA10(S100A10) 规格：48T/96T 进口、国产
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforInterleukin1ReceptorAntagonist(IL1RA) 规格：48T/96T 进口、国产
核仁磷酸蛋白(NPM)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforNucleophosmin(NPM) 规格：48T/96T 进口、国产
松弛肽(RLN)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforRelaxin(RLN) 规格：48T/96T 进口、国产
G底物(GSBS)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforGSubstrate(GSBS) 规格：48T/96T 进口、国产
甘油激酶(GK)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforGlycerolKinase(GK) 规格：48T/96T 进口、国产
凝血因子Ⅴ(F5)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforCoagulationFactorV(F5) 规格：48T/96T 进口、国产
葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(酶联吸附试验法) ELISAKitforGlucose6PhosphateDehydrogenase(G6PD) 规格：48T/96T 进口、国产