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逆转录实验步骤
日期：2025-05-12 22:18
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摘要：
逆转录（reverse transcription），是以RNA为模板合成DNA的过程，合成的DNA称为cDNA。逆转录过程遗传信息的流动方向为RNA到DNA，与转录过程DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录。
实验步骤：
1、试剂化冻后，用手轻弹混匀后短暂离心。
2、 基因组DNA（gDNA）去除：根据RNA样品的浓度按10pg~1μg计算用量，在RNase-free离心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA样品，总体系为10μL。用移...
逆转录（reverse transcription），是以RNA为模板合成DNA的过程，合成的DNA称为cDNA。逆转录过程遗传信息的流动方向为RNA到DNA，与转录过程DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录。
实验步骤：
1、试剂化冻后，用手轻弹混匀后短暂离心。
2、 基因组DNA（gDNA）去除：根据RNA样品的浓度按10pg~1μg计算用量，在RNase-free离心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA样品，总体系为10μL。用移液器吹打混匀后短暂离心。放入PCR仪，设置反应条件为42℃ 2min。
3、第1链cDNA合成：根据上一步反应管的数量按以下体系在RNase-free离心管中配制预混液：RNase-free ddH2O 5μL，逆转录引物（2μM）1μL，10×RT Mix 2μL，HiScript II Enzyme Mix 2μL，用移液器吹打混匀后短暂离心。在上一步得到的反应管中每管加入10μL，用移液器吹打混匀后短暂离心。放入PCR仪，设置反应条件为25℃ 5min，50℃ 15min，85℃ 5min。所得cDNA产物可立即用于qPCR反应或-20℃保存。