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荧光定量PCR熔解曲线解读
日期：2025-04-29 07:30
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摘要：
熔解曲线的解读：
一般来说，根据引物设计原则，荧光定量PCR扩增产物长度在80~200 bp之间，对应的熔解温度在80~90℃之间。
在阴性对照没有扩增的情况下，可以根据熔解曲线验证扩增产物的特异性：
1、熔解曲线在80~90℃之间出现唯1单峰，表明PCR产物特异性好。
2、熔解曲线出现双峰，在80~90℃之间出现主峰，80℃以下（一般为60~75℃之间）出现杂峰，基本考虑产物中可能存在引物二聚体，可尝试提高退火温度、降低引物浓度、重新设计引物等方法解决。
3、熔解曲线出现双峰，在80...
熔解曲线的解读：
一般来说，根据引物设计原则，荧光定量PCR扩增产物长度在80~200 bp之间，对应的熔解温度在80~90℃之间。
在阴性对照没有扩增的情况下，可以根据熔解曲线验证扩增产物的特异性：
1、熔解曲线在80~90℃之间出现唯1单峰，表明PCR产物特异性好。
2、熔解曲线出现双峰，在80~90℃之间出现主峰，80℃以下（一般为60~75℃之间）出现杂峰，基本考虑产物中可能存在引物二聚体，可尝试提高退火温度、降低引物浓度、重新设计引物等方法解决。
3、熔解曲线出现双峰，在80~90℃之间出现主峰，90℃以上又出现杂峰，基本考虑有非特异性扩增。若模板中有基因组DNA污染导致非特异性扩增，可通过跨内含子设计引物或去除基因组DNA等方法解决。