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PCR 出现无扩增条带问题原因及对策
日期：2024-05-02 05:41
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摘要：PCR 出现无扩增条带问题原因及对策
PCR 出现无扩增条带问题原因及对策：
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1、酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
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2、模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。
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3、变性温度是否准确：PCR 仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。
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4、反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加 Taq 酶以前，将反应体系 95 ℃ 加热 5~10 分钟。
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5、引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。
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6、引物错误。利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。
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7、DNA 凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是 DNA 凝胶和 PCR 程序的问题。