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PCR电泳无扩增条带结果原因分析
日期：2024-04-29 19:28
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摘要：PCR电泳无扩增条带结果分析
PCR电泳无扩增条带结果原因分析：
1、酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
2、模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。
3、变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。
4、反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加Taq酶以前，将反应体系95℃加热5-10分钟。
5、引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。
6、引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
7、DNA凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是DNA凝胶和PCR程序的问题。