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荧光定量PCR染料法和探针法简述
日期：2025-06-10 01:22
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摘要：
PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）是一种在体外模拟DNA复制过程的技术。通过设计特异性引物，PCR可以扩增目标DNA片段，使其在短时间内达到可检测的水平。PCR主要包括三个阶段：变性、退火和延伸。荧光定量PCR原理：荧光定量PCR在传统PCR基础上，引入了荧光标记技术。
根据荧光标记物的不同，荧光定量PCR可分为两种：染料法和探针法。
1、染料法
染料法利用一种能与双链DNA特异性结合的荧光染料，如SYBR Green I。在PCR反应体系中，染料与双链DNA结合后，荧光信号增强。随着PCR反应的进行，扩增...
PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）是一种在体外模拟DNA复制过程的技术。通过设计特异性引物，PCR可以扩增目标DNA片段，使其在短时间内达到可检测的水平。PCR主要包括三个阶段：变性、退火和延伸。荧光定量PCR原理：荧光定量PCR在传统PCR基础上，引入了荧光标记技术。
根据荧光标记物的不同，荧光定量PCR可分为两种：染料法和探针法。
1、染料法
染料法利用一种能与双链DNA特异性结合的荧光染料，如SYBR Green I。在PCR反应体系中，染料与双链DNA结合后，荧光信号增强。随着PCR反应的进行，扩增产物不断积累，荧光信号也随之增强。通过实时监测荧光信号的变化，可以计算出目标DNA的初始浓度。
2、探针法
探针法采用一种特异性荧光标记的探针，如TaqMan探针。探针的5'端标记报告荧光基团，3'端标记淬灭荧光基团。在探针完整时，报告荧光基团的荧光信号被淬灭基团抑制。当PCR反应进行到退火阶段，探针与目标DNA特异性结合，Taq酶的5'→3'外切酶活性将探针切断，使报告荧光基团与淬灭荧光基团分离，荧光信号得以释放。通过实时监测荧光信号的变化，可以实现对目标DNA的定量。