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高香草酸试剂盒操作流程的介绍
日期：2024-05-07 18:14
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摘要：
高香草酸试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中高香草酸(HVA)水平。用纯化的高香草酸(HVA)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入高香草酸(HVA)，再与HRP标记的高香草酸(HVA)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的高香草酸(HVA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中高香草酸(HVA)浓度。
高香草酸试剂盒操作流程如下：
1.待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
2.酶标板置4℃，包被过夜。
3.洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后，即甩去，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4.阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
5.酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
6.洗板，同4。
7.每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8.酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
9.洗板，同4。
10.每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
11.每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12.分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终测得的od值为两者之差w1-w2，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13.数据处理：在得出标本s和阴性对照n的od值后，计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。