产品名称
小鼠结肠成纤维细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
结肠
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
分类
小鼠原代细胞
货号
A01X1811
用途
仅供科研实验
培养信息：
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
小鼠结肠成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞简介：
小鼠结肠成纤维细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的结肠成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介：
实验室分离的小鼠结肠成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的小鼠结肠成纤维细胞经Vimentin荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
①动物处理：用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡，然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒（浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内，影响培养）后迅速置于的培养皿中，带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材：将乳鼠俯卧位，用乙醇进行一次背部，再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤，剖开腹部，取出肝脏放入另一培养皿中，除去其他连带组织，用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次，每次1~2 ml，洗去血污，将废液弃于废液杯中。
③组织分离：用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除，然后将肝组织反复剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小块后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次，弃废液。
④接种：用吸管加2滴小牛血清，小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地（组织块之间相距约0.5 cm左右）排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。
⑤培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入1~2 ml培养液，拧紧瓶盖，做好标记，置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢翻转培养瓶（尽量注意不要使组织块漂浮起来），另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块，将瓶盖调整在略微松弛状态，继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察：细胞接种后一般几个小时内即可贴壁，并开始生长。如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞，这时可进行传代培养。
原代细胞步骤：
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；
2. 加入2mmol 的 EDTA，摇匀后放置冰上约 30-60min；
3. 离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期间，置于37°培养箱。每15min摇晃一次，消化时间根据肿瘤组织来定，约1-2h；
5. 待大部分组织块消化成透明状时，用 40μm 的细胞滤网过滤细胞，收集；
6. 用培养基重悬，置于培养箱培养。
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