
产品名称
人角膜上皮细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
眼角膜组织
生长特性
贴壁
细胞形态
上皮细胞样
分类
人原代细胞
货号
A01X1470
用途
仅供科研实验
培养信息:
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞简介:
人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神经末梢,如有外物接触角膜,眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明,角膜并没有血管,透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下:①角膜是的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能,分三层细胞层,外层即是上皮细胞;②角膜上皮细胞能参与先天性,能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和对细胞生长的影响。
方法简介:
公司实验室分离的人角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的人角膜上皮细胞经PCK荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
①动物处理:用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡,然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒(浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内,影响培养)后迅速置于的培养皿中,带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材:将乳鼠俯卧位,用乙醇进行一次背部,再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤,剖开腹部,取出肝脏放入另一培养皿中,除去其他连带组织,用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次,每次1~2 ml,洗去血污,将废液弃于废液杯中。
③组织分离:用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除,然后将肝组织反复剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小块后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次,弃废液。
④接种:用吸管加2滴小牛血清,小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液,然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地(组织块之间相距约0.5 cm左右)排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。

⑤培养:将培养瓶慢慢翻转,使瓶底向上,加入1~2 ml培养液,拧紧瓶盖,做好标记,置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时,待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后,再缓慢翻转培养瓶(尽量注意不要使组织块漂浮起来),另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块,将瓶盖调整在略微松弛状态,继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察:细胞接种后一般几个小时内即可贴壁,并开始生长。如果无污染且细胞生长良好,可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色,此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞,这时可进行传代培养。
原代细胞步骤:
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织,剔除包膜及坏死组织,无菌PBS清洗3-5次;切成约1mm3组织块;
2. 加入2mmol 的 EDTA,摇匀后放置冰上约 30-60min;
3. 离心,并加入胶原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期间,置于37°培养箱。每15min摇晃一次,消化时间根据肿瘤组织来定,约1-2h;
5. 待大部分组织块消化成透明状时,用 40μm 的细胞滤网过滤细胞,收集;
6. 用培养基重悬,置于培养箱培养。

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