
产品名称
大鼠胎盘间充质干细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
胎盘组织
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
分类
大鼠原代细胞
货号
A01X1753
用途
仅供科研实验
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞简介:
大鼠胎盘间充质干细胞细胞分离自胎盘组织;胎盘(placenta)是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官,由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在中发育,依靠胎盘从母体取得营养,而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的,是一个重要的器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代,胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合,以达到母子间物质的交换,这样的结构称假胎盘。胎盘间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一种多能干细胞,是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞像APSC多能细胞。在胚胎发育中来源于中胚层。在机体正常的组织损伤修复过程中,MSC是一种重要的参与组织再生的细胞库。在组织损伤引起的特殊信号作用下,MSC迁移到受损部位,在局部聚集增殖,依据不同的损伤信号沿着不同途径分化。MSC易于分离扩增,体外倍增能力旺盛,能保持其多向分化能力。因此,MSC是一种实用的组织修复种子细胞。相较于其他干细胞,胎盘间充质干细胞具有来源方便,细胞数量充足,易于分离、培养、扩增和纯化,传代扩增多代后仍具有干细胞特性。胎盘是干细胞的佳来源。
方法简介:
公司实验室分离的大鼠胎盘间充质干细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的大鼠胎盘间充质干细胞经CD90荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
①动物处理:用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡,然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒(浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内,影响培养)后迅速置于的培养皿中,带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材:将乳鼠俯卧位,用乙醇进行一次背部,再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤,剖开腹部,取出肝脏放入另一培养皿中,除去其他连带组织,用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次,每次1~2 ml,洗去血污,将废液弃于废液杯中。
③组织分离:用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除,然后将肝组织反复剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小块后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次,弃废液。
④接种:用吸管加2滴小牛血清,小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液,然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地(组织块之间相距约0.5 cm左右)排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。

⑤培养:将培养瓶慢慢翻转,使瓶底向上,加入1~2 ml培养液,拧紧瓶盖,做好标记,置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时,待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后,再缓慢翻转培养瓶(尽量注意不要使组织块漂浮起来),另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块,将瓶盖调整在略微松弛状态,继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察:细胞接种后一般几个小时内即可贴壁,并开始生长。如果无污染且细胞生长良好,可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色,此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞,这时可进行传代培养。
原代细胞步骤:
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织,剔除包膜及坏死组织,无菌PBS清洗3-5次;切成约1mm3组织块;
2. 加入2mmol 的 EDTA,摇匀后放置冰上约 30-60min;
3. 离心,并加入胶原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期间,置于37°培养箱。每15min摇晃一次,消化时间根据肿瘤组织来定,约1-2h;
5. 待大部分组织块消化成透明状时,用 40μm 的细胞滤网过滤细胞,收集;
6. 用培养基重悬,置于培养箱培养。

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大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞
小鼠心脏微血管内皮细胞
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