
培养方法与步骤:
①动物处理:用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡,然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒(浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内,影响培养)后迅速置于的培养皿中,带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材:将乳鼠俯卧位,用乙醇进行一次背部,再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤,剖开腹部,取出肝脏放入另一培养皿中,除去其他连带组织,用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次,每次1~2 ml,洗去血污,将废液弃于废液杯中。
③组织分离:用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除,然后将肝组织反复剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小块后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次,弃废液。
④接种:用吸管加2滴小牛血清,小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液,然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地(组织块之间相距约0.5 cm左右)排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。

⑤培养:将培养瓶慢慢翻转,使瓶底向上,加入1~2 ml培养液,拧紧瓶盖,做好标记,置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时,待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后,再缓慢翻转培养瓶(尽量注意不要使组织块漂浮起来),另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块,将瓶盖调整在略微松弛状态,继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察:细胞接种后一般几个小时内即可贴壁,并开始生长。如果无污染且细胞生长良好,可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色,此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞,这时可进行传代培养。
产品名称
大鼠结肠成纤维细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
结肠
生长特性
贴壁
细胞形态
成纤维细胞样
分类
大鼠原代细胞
货号
A01X1566
用途
仅供科研实验
培养信息:
包被条件:
培养基:含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传3代左右
消化液:0.25%胰蛋白酶
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠结肠成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞简介:
大鼠结肠成纤维细胞分离自结肠组织;结肠在右髂窝内续于盲肠,在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分,大部分固定于腹后壁,结肠的排列酷似英文字母“M”,将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为:黏膜(上皮层、固有层、黏膜肌层),黏膜下层(疏松结缔组织),肌层(内环形、外纵行两层平滑肌),外膜(纤维膜或浆膜)。结肠成纤维细胞主要分布于外膜(纤维膜或浆膜)结缔组织内。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的结肠成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
方法简介:
实验室分离的大鼠结肠成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的大鼠结肠成纤维细胞经Vimentin荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
公司正在出售的产品:
DMEM完全培养液
小鼠破伤风(Tetanus)抗体elisa分析检测试剂盒
大鼠肝细胞生长因子激活物(HGFA)elisa检测试剂盒免费代测
细胞组织D(CATHEPSIN D)活性比色法定量检测试剂盒
人多萜长醇二磷酸寡糖蛋白环糊精糖基转移酶(DDOST/OST-48)elisa检测试剂盒
大鼠孕烷X受体(PXR)elisa检测试剂盒
FSH-BETA蛋白共沉淀分析试剂盒
小鼠β防御素(β-Defensin)elisa检测试剂盒
硝酸还原酶NR测试盒 100管/48样 50管/24样 可见光比色法
AU5 tag标签抗体 AU5 tag
B细胞特异性激活OCT结合蛋白1抗体 BOB1
赖氨酸N甲基转移酶1D/EHMT1抗体 KMT1D
亮氨酸拉链结构域蛋白ROGDI抗体 ROGDI
α葡萄糖苷酶2抗体 GANAB
阿黑皮素原抗体 POMC
细胞角蛋白26抗体 KRT26
细胞色素P450 IVF8抗体 CYPIVF8
KPRP蛋白抗体 KPRP
MAP激酶激活死亡域蛋白2C抗体 DENND2C
热休克蛋白-20抗体 HSPB6
绒毛膜特异性转录因子GCMa抗体 GCMA
干扰素α受体2抗体 IFNAR2
谷氨酸受体2A抗体 NMDAR2A
着丝粒蛋白Q抗体 CENPQ
重组兔血管紧张素转换酶单克隆抗体 ACE2
人1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa分析检测试剂盒
大鼠结肠成纤维细胞组织巨噬细胞型抗酒石酸酸性磷酸酶(STRACP)活性比色法定量检测试剂盒
小鼠分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)elisa检测试剂盒
GlialCAM; HECAM_HUMAN; HEPACAM; Hepatocyte cell adhesion molecule; Protein hepaCAM.
大鼠结肠平滑肌细胞
羊肺动脉内皮细胞
CAOV-3人卵巢腺癌细胞
AAV-293人胚肾细胞
原代细胞步骤:
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织,剔除包膜及坏死组织,无菌PBS清洗3-5次;切成约1mm3组织块;
2. 加入2mmol 的 EDTA,摇匀后放置冰上约 30-60min;
3. 离心,并加入胶原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期间,置于37°培养箱。每15min摇晃一次,消化时间根据肿瘤组织来定,约1-2h;
5. 待大部分组织块消化成透明状时,用 40μm 的细胞滤网过滤细胞,收集;
6. 用培养基重悬,置于培养箱培养。