产品名称
大鼠股骨头微血管内皮细胞
产品规格
5×105cells/T25细胞培养瓶
组织来源
骨
生长特性
贴壁
细胞形态
内皮细胞样
分类
大鼠原代细胞
货号
A01X1681
用途
仅供科研实验
培养信息：
包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）
培养基：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：内皮细胞样
传代特性：可传1-3代左右；2代以内状态佳
消化液：0.25%胰蛋白酶，Accutase
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
大鼠股骨头微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的生长培养基及正确的操作方法来培养，
细胞简介：
大鼠股骨头微血管内皮细胞分离自骨组织；股骨头（caput
femoris）呈圆形，约占一圆球的2/3，其上完全为关节软骨所覆盖，在其顶部微后有一小窝，称为股骨头凹，为股骨头韧带附着处，股骨头可由此获得少量血供。股骨头骨髓的微血管结构为珊瑚状，后微动脉与微静脉部分膨大、迂曲、互相缠绕；骨微血管内皮细胞构成了骨内微血管的内衬，与骨内其他成分联系密切，参与了许多骨的病理生理过程在骨吸收新骨的形成血管再生营养物质转运骨内代谢产物输出及维持骨内微环境平衡方面具有重要作用。
方法简介：
实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮细胞采用混合胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：
实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮细胞经CD31荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和等。
①动物处理：用颈椎脱白法处死使新生乳鼠断髓迅速死亡，然后将整个乳鼠浸入盛有75%酒精的烧杯中2~3秒（浸泡时间不能过长、以免酒精从口浸入体内，影响培养）后迅速置于的培养皿中，带入超净工作台内进行无菌操作取材。
②取材：将乳鼠俯卧位，用乙醇进行一次背部，再用的解剖剪剪开背部肋下缘脊柱两侧的皮肤，剖开腹部，取出肝脏放入另一培养皿中，除去其他连带组织，用消过毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝组织3次，每次1~2 ml，洗去血污，将废液弃于废液杯中。
③组织分离：用眼科剪和镊子将肝门区所附的血管结缔组织尽可能去除，然后将肝组织反复剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小块后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反复吹打清洗组织块儿3次，弃废液。
④接种：用吸管加2滴小牛血清，小心地用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液、将其均匀地（组织块之间相距约0.5 cm左右）排种在培养瓶底壁上; 每个25ml的培养瓶中可接种20块左右。
⑤培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入1~2 ml培养液，拧紧瓶盖，做好标记，置 37 ℃恒温箱中培养1~2小时，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢翻转培养瓶（尽量注意不要使组织块漂浮起来），另加入培养液2 ml左右使其能覆盖组织块，将瓶盖调整在略微松弛状态，继续置37 ℃恒温箱静放培养。
⑥观察：细胞接种后一般几个小时内即可贴壁，并开始生长。如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液。10~15天后可长成致密单层细胞，这时可进行传代培养。
原代细胞步骤：
1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；
2. 加入2mmol 的 EDTA，摇匀后放置冰上约 30-60min；
3. 离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期间，置于37°培养箱。每15min摇晃一次，消化时间根据肿瘤组织来定，约1-2h；
5. 待大部分组织块消化成透明状时，用 40μm 的细胞滤网过滤细胞，收集；
6. 用培养基重悬，置于培养箱培养。
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